R&D Recombinant Proteins FAQ

R&D protein에 CF라고 쓰여있는 것을 확인할 수 있는데 의미가 무엇인가요?

어떤 실험을 할 때 CF를 사용하나요?

R&D protein을 발현시킨 source는 어떤 것들이 있나요?

예전에 주문했던 Lot과 다른 lot이여도 activity에는 문제가 없나요?

주문한 10ug protein의 농도를 Bradford로 측정하였는데 농도가 다르게 나와요. 왜 그런가요?

R&D protein의 유효기간은 어떻게 되나요?

Protein의 data sheet를 보면 ED50 값이 있는데 ED50가 뭔가요?

Protein의 농도가 10ug 밖에 없는 데 더 큰 용량은 판매가 안되나요?

CoA sheet에 있는 [Date Bottled] ..의미가 뭔가요?

Reconstitution buffer가 acidic buffer (4mM HCl)로 되어 있는데, 그냥 PBS로 녹이면 안되나요?

R&D의 protein은 ug 단위를 사용하는데 IU (international units) 값을 알 수 있나요?

R&D data sheet에 없는 application인 경우에도 사용 가능한가요? 또는 human protein을 mouse cell에 적용 가능한가요?

KDa을 g/M로 계산하는 방법은 어떻게 되나요?

R&D protein을 reconstitution할 때 PBS에 1% BSA를 첨가하라고 되어 있는데 그 이유는 뭔가요? 또한 BSA는 따로 판매하고 있나요?

몇몇 protein의 경우 Fc Fusion 형태로 되어 있는데 그 이유는 뭔가요?

Formulation을 보면 protein에 trehalose가 포함되어 있는데 이것은 무엇인가요? 또 왜 들어가 있나요?

Trehalose가 conjugation 반응이나 다른 실험에 방해가 되지는 않나요?

Bulk 용량 요청 시, liquid form이 기본인 이유가 무엇인가요? 또, lyophilized form은 guarantee가 안되는 이유는 무엇인가요?

Q : R&D protein에 CF라고 쓰여있는 것을 확인 할 수 있는데 의미가 뭔가요?

A : CF는 carrier free라는 뜻입니다. Carrier는 BSA를 말합니다. 즉 CF 제품은 BSA가 들어가 있지 않은 제품입니다. 보통 R&D에서는 protein의 농도를 높여서 안정성을 높여주세 되는데, 일반적으로 protein 1ug당 50ug의 BSA가 첨가됩니다.

Q : 어떤 실험을 할 때 CF를 사용하나요?

A : 일반적인 cell culture시에는 carrier가 들어가 있는 protein을 권장합니다. 그 외에 carrier가 방해가 되는 실험에서는 CF를 권해드립니다. 자세한 내용은 아래 표를 참고 하세요

Q : R&D protein을 발현시킨 source는 어떤 것들이 있나요?

A : 일반적으로 E.Coli에서 발현시킨 protein이 많으며, 그 외에 NS0, CHO, Sf21등이 있습니다. NS0이 protein의 activity는 가장 좋습니다.

Q : 예전에 주문했던 Lot과 다른 Lot이여도 activity에는 문제가 없나요?

A : 네. Activity는 동일합니다. 왜냐하면 R&D protein은 Lot-to-Lot variation이 거의 없습니다. 그 이유는 R&D protein은 Lot별로 농도 test, SDS-PAGE, Endotoxin, Sequencing, Mass spec (Maldi, protein ID), HPLC, Deglycosylation, Kinetic Group 등의 다양한 QC단계가 이루어 지기 때문입니다. 또한 QC test는 Bulk 뿐만 아니라 vial로 나눈 후에도 test가 이루어 집니다.

Q : 주문한 10ug protein의 농도를 Bradford로 측정하였는데 농도가 다르게 나와요. 왜 그런가요?

A : Bradford는 Lysine, Arginine, Histidine 잔기에만 붙어서 염색이 되기 때문에 그 값이 정확하지 않습니다. 따라서 R&D에서는 농도를 결정할 때 Coomassie (Bradford) assay, BSA standard curve, A280의 측정 외에 E280을 측정하여 그 값을 보정해 주게 됩니다. 이 외에도 Lowry method 등으로 정확한 농도를 결정합니다. 따라서 R&D의 protein 농도는 믿고 사용하시면 됩니다.

Q : R&D protein의 유효기간은 어떻게 되나요?

A : R&D에서는 따로 protein의 유효 기간을 정하고 있지 않습니다. 왜냐하면, 보관상태에 따라 몇 년 동안도 사용 가능하기 때문입니다. 다만, R&D에서는 제품을 구입하고 6-12개월에 대해서만 guarantee하고 있습니다. 자세한 유효기간은 data sheet를 확인하세요.

Q : protein의 Data sheet를 보면 ED50값이 있는데 ED50가 뭔가요?

A : ED50는 effect dose 50으로 R&D에서는 protein의 activity를 농도 별로 확인하고 activity를 나타내는 중간 값을 표시하고 있습니다. 이를 ED50 값이라고 합니다.

Q : protein의 농도가 10ug 밖에 없는데 더 큰 용량은 판매 되나요?

A : 예, 판매 가능합니다. R&D에서는 일반적으로 최소 500ug이상의 protein을 Bulk로 판매하고 있습니다. 다만, 기본적으로 Bulk는 liquid type이며, 견적을 따로 요청하여 받아야 하기 때문에 1-2일 정도 소요 됩니다. 또한 lyophilized form이나 vial을 나누게 되면 추가 비용이 발생할 수 있습니다.

Q : CoA sheet에 있는 [Date Bottled] ..의미가 뭔가요?

A : 말 그대로 해당 제품을 병에 담은 날짜입니다. [병입 년월일]이라고도 하죠. 간혹, 일년 이상 지난 제품을 받으시고 활성이 떨어지거나 없어지지는 않았을까 하는 걱정에 문의 하시는 유저분들이 계십니다. R&D에서는 해당 lot에 대해 주기적으로 QC 하고 있고, 문제가 없는 lot만 배송하고 있습니다. 그러니 Date Bottled 날짜에 대해서는 신경쓰지 마시고 사용하시면 됩니다.

Q 1: 일부 단백질 중 reconstitution buffer가 acidic buffer (4mM HCl)를 사용하는데 그 이유는 뭔가요? 그냥 PBS로 녹이면 안되나요?

A : 일부 단백질 중 중성 pH (pH7.4)에서 hydrophobic (소수정)의 특성을 가지게 되어 정확한 활성을 가지지 못하는 높은 pI의 단백질들이 있습니다. 따라서 data sheet에 기재된 buffer를 사용하지 않을 경우에 단백질 활성의 loss 뿐만 아니라 구조적으로 aggregation form을 형성하게 되어 vial이나 tip등에 더 많은 loss가 발생하게 됩니다.

Q 2: R&D의 protein은 ug 단위를 사용하는데 IU (international units) 값을 알 수 있나요?

A : 1 unit은 ED50값과 동일하게 정의됩니다. 따라서 회사별로 또는 bioassay의 condition에 따라서 다른 값으로 나오게 됩니다. 그런 이유로 R&D에서는 IU값을 사용하지 않고 있습니다. 다만, R&D 홈페이지에 WHO conversion table을 통해 몇몇 cytokine에 대해서 IU값을 제공하고 있습니다 (http://www.rndsystems.com/who_conversion/aspx). 그 외에 protein등은 ED50의 midpoint를 이용하여 적절한 값을 찾거나 reference를 참조하시기를 권해드립니다.

Q 3: R&D data sheet에 없는 application인 경우에도 사용이 가능한가요? 또는 human protein을 mouse cell에 적용 가능한가요?

A : data sheet에 application이 없는 경우는 R&D의 in house test를 하지 않은 경우입니다. 또한 본사 technical team에서 reference work을 통해 application을 확인해 줄 수는 있으나, guarantee는 되지 않습니다. Human protein을 mouse에 적용하는 것 또한 마찬가지로, reference등에서 확인이 되어도 본사 guarantee는 되지 않습니다.

Q 4 : KDa을 g/M로 계산하는 방법은 어떻게 되나요?

A : R&D에서는 protein의 단위를 MW으로 표시하고 있습니다. 대략 1dalton = 1gram/mol과 동일합니다. 즉, 8KDa protein은 8,000gram/mol입니다. 또한 아래 표를 참조하세요.

1 mole of a 50kDa = 50,000g

1 mmole of a 50kDa = 50g or 50,000,000ug

1 micromole of a 50kDa = 50.000ug

1 nmole of a 50kDa = 50ug

Q 5: R&D protein을 reconstitution할 때 PBS에 1% BSA를 첨가하라고 되어 있는데 그 이유는 뭔가요? 또한 BSA는 따로 판매하고 있나요?

A : R&D에서 BSA를 따로 판매하고 있지는 않습니다. 단, R&D에서 사용하는 BSA는 Celliance, a Serologucals company의 Fraction V BSA, Very Low Endotoxin (cat# 81-068) 제품입니다.

Q 6: 몇 몇 protein의 경우 Fc Fusion 형태로 되어 있는데 그 이유는 뭔가요?

A : membrane protein (hydrophobic) 처럼 불안정한 단백질들이 있습니다. 이런  경우 Fc Chimera부분을 fusion시키면 단백질의 안정화를 유도할 수 있습니다. 또한 membrane receptor등의 경우, soluble receptor만 있는 경우보다 Fc fusion과 함께 dimer의 형성을 유도하는 경우 affinity가 더 좋아집니다. 그 외에 R&D에서는 Fc portion만 따로 control로 제공하고 있습니다. (rh IgG Fc #110-HG, rM IgG2A Fc #4460-MG).

Q 7: Formulation을 보면 protein에 trehalose가 포함되어 있는데, 이것은 무엇인가요? 또한 왜 들어가 있나요?

A : Trehalose는 non-reducing sugar로서 A.A와 protein과는 반응하지 않습니다. 이 trehalose는 식물이나 동물에서 발견되며, freezing과정에서의 damage로부터 protein을 가장 안정하게 해주는 sugar로 알려져 있습니다. 또한 trehalose는 lysophilized 과정에서 수분을 적게 흡수하여, reconstitution시 침전물을 없게 하는 역할도 합니다.

Q 8: Trehalose가 conjugation 반응이나 다른 실험에 방해가 되지는 않나요?

A : trehalose는 protein conjugation이나 다른 실험에 방해가 될 수도 있습니다. 따라서 고객분께서 하시는 실험에 대해서 trehalose를 control로 사용하여 test하는 방법 등으로 trehalose effect를 확인하여야 합니다. 

Q 9: Bulk 용량 요청 시, lyophilized form이 안 되는 이유는? lyophilized form의 bulk는 guarantee가 안 되는 이유는 뭔가요?

A : lyophilized form이라도, insert 상의 조건과 동일한 조건으로 reconstitution하는 경우에는 guarantee 할 수 있으나, 사용자가 고농도로 reconstitution하려고 하는 경우에는 고농도로 인해 발생할 수 있는 여러 문제점들(충분히 녹지 않을 가능성, aggregation 될 가능성 등)로 인해 guarantee 할 수 없습니다. 그 외 대용량의 protein을 lyophilization 하는데 큰 비용으로 인해 제작이 힘들 수 있습니다.